| 研究生: |
周廷光 ZHOU,TING-GUANG |
|---|---|
| 論文名稱: |
菸草嵌紋病毒感染與植物抽出物對其抑制之螢光免疫學之研究 |
| 學位類別: |
博士
Doctor |
| 系所名稱: |
國立台灣大學 - 植物病蟲害研究所 |
| 畢業學年度: | 62 |
| 語文別: | 中文 |
| 論文頁數: | 105 |
| 中文關鍵詞: | 菸草 、嵌紋病 、病毒感染 、植物抽出體 、螢光免疫學 、病組織切片 、螢光抗體法 、寄主植物 |
| 外文關鍵詞: | N.GLUTINOSA, VIRUS-INFECTION |
| 相關次數: | 點閱:131 下載:0 |
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兩系統煙莫嵌紋病毒(普通型及番茄型)純化後,做免疫血清,並將抗體分離出,使與螢光物質結合而製成螢光抗體。經過免疫電氣泳動、阻止反應校對測定、不同病毒病植物之葉部切片染色反應、以及對不同濃度煙草嵌紋病毒之凝結反應等測定,得知所製備之螢光抗體純度極高,且其特異性及敏感度均適用於螢光抗體法。組織切片之前處理固定劑,以丙酮及氯仿較優,能有效地減除葉綠素之橙色自家螢光,進而改善螢光抗體染色法。病組織之切片以螢光抗體直接或間接染色,在染色效果及非特異物著染上,兩者並無多大差異,唯間接染色可得較柔和之螢光。螢光抗體之貯存,以添加0.1%的氮化納後,在放於4℃ 之冰箱中,比凍結貯存更能有效地保存其血清反應活性。
本試驗專以螢光抗體直接染色法,進行探討兩系統病毒在局部化及全身性感染之植物上之增殖、分布及轉移等狀況。螢光抗體對相對之病毒抗原具有親合力,而兩者之凝集物,呈現黃綠色螢光。嵌紋病葉之黃綠色部份,螢光較強且分佈較密;而暗綠色部分,似可抵抗病毒之侵入,螢光較淡,分佈亦較稀疏。全身性感染植物之葉柄、莖及根之表皮與皮層部分,其螢光抗原分佈較濃,愈向中央愈淡,但在中央部份,螢光抗原分佈較均勻。感染病毒之葉部螢光抗原,則分佈於表皮、柵狀組織、海綿組織及韌皮部等處,然而在木質部則未曾發現有黃綠色之螢光,往往呈現銀白色的非特異自家螢光。在完全局部化的寄主植物(N. glutinosa)罹病葉上,螢光抗原僅呈現於局部病斑處,周圍之健全組織則無。在不完全局部化之罹病植物(C. amaranticolor)葉上,螢光抗原則可出現於接種葉片上病斑以外之組織,甚而可蔓延至上部之葉中,而呈零星分佈。一般罹病植物上之病毒測出,螢光抗體法要比感染力生物測定法來得遲緩;然而對含有抑制物質之植物,則以螢光抗體法較為銳敏,且便於測定病毒抗原在組織中之分佈。數種植物經兩系統病毒接種後,以螢光抗體法及感染力生物測定法檢定,
得知番茄型病毒在菸草Xanthi種及N. glutinosa煙草上之增殖速度,比普通型病毒快,如在N. glutinosa之接種葉,番茄型病毒抗原接種後12小時即可測出,而普通型病毒抗原則需2 日之久。在Bright Yellow 煙草則兩種抗原以螢光抗體法,均可於12小時後測出。然而普通型病毒於接種後3 小時,可以生物檢定法測得,而番茄型病毒在接種後12小時可測出。
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